رقیق سازی: توضیحات و نمونه هایی از روشهای مشترک

روش های بسیاری برای بیان غلظت و رقیق وجود دارد. در زیر توضیح مختصری در مورد برخی از روشهای محاسبه رقیق کننده ها که در علوم بیولوژیکی رایج است و اغلب در زیست شناسی Quansys مورد استفاده قرار می گیرد.

با استفاده از C₁V₁ = C₂V₂

برای تهیه مقدار ثابت راه حل رقیق از محلول سهام ، می توانید از فرمول استفاده کنید: C₁V₁ = C₂V₂جایی که:

• V₁= حجم محلول سهام مورد نیاز برای تهیه راه حل جدید
• C₁= غلظت محلول سهام
• V₂= حجم نهایی راه حل جدید
• C₂= غلظت نهایی راه حل جدید
• مثال: از محلول 1 متر 5 میلی لیتر از محلول 0. 25 متر تهیه کنید
• فرمول: ج₁V₁ = C₂V₂
• مقادیر پلاگین در: (v₁) * (1 متر) = (5 میلی لیتر) * (0. 25 متر)
• تنظیم مجدد: V₁= [(5 میلی لیتر) * (0. 25 متر)] / (1 متر) v₁= 1. 25 میلی لیتر
• پاسخ: 1. 25 میلی لیتر از محلول 1 متر را در V قرار دهید₁ V₂= 5 میلی لیتر - 1. 25 میلی لیتر = 3. 75 میلی لیتر رقیق کننده

برای ایجاد یک محلول رقیق و بدون محاسبه غلظت ، می توانید به مشتق فرمول فوق اعتماد کنید: (حجم نهایی / حجم املاح) = فاکتور رقیق سازی (همچنین می تواند با جرم استفاده شود)

این روش بیان رقیق به عنوان نسبت قسمتهای املاح به تعداد کل قطعات در زیست شناسی رایج است. از ضریب رقیق (DF) می توان به تنهایی یا به عنوان مخرج کسری استفاده کرد ، به عنوان مثال ، DF 10 به معنای رقیق 1:10 یا 1 قسمت املاح + 9 قسمت رقیق کننده برای کل 10 قسمت است. این متفاوت از "نسبت رقت" است ، که به طور معمول به نسبت قسمت های املاح به قسمت های حلال اشاره دارد ، به عنوان مثال ، 1: 9 با استفاده از مثال قبلی. فاکتورهای رقیق کننده مربوط به نسبت رقت هستند که DF با قسمت های حلال + 1 برابر است.

• مثال: 300 میکرولیتر از رقت 1: 250 درست کنید
• فرمول: حجم نهایی / حجم املاح = DF
• مقادیر پلاگین در: (300 میکرولیتر) / حجم املاح = 250
• تنظیم مجدد: حجم املاح = 300 میکرولیتر در 250 = 1. 2 میکرولیتر
• پاسخ: 1. 2 میکرولیتر از محلول سهام را در 300 میکرولیتر قرار دهید - 1. 2 میکرولیتر = 298. 8 میکرولیتر رقیق کننده

اگر فاکتور رقیق کننده از حجم نهایی مورد نیاز بزرگتر باشد ، یا مقدار سهام برای پیپت بسیار کوچک باشد ، ممکن است یک یا چند رقت واسطه لازم باشد. از فرمول استفاده کنید: نهایی df = df1 * df2 * df3 و غیره ، تا رقیق های مرحله خود را به گونه ای انتخاب کنید که محصول آنها رقت نهایی باشد.

• مثال: فقط 300 میکرولیتر از رقیق 1: 1000 ایجاد کنید ، با فرض اینکه کمترین حجم می توانید پیپت 2 میکرولیتر است
• مرحله DFS را انتخاب کنید: با یک ضریب رقیق کننده 1000 ، می توانید 1:10 را انجام دهید و به دنبال آن 1: 100 (10 * 100 = 1000)
• فرمول برای 1:10 رقت: حجم نهایی / حجم املاح = DF
  • مقادیر پلاگین در: (20 میکرولیتر) / حجم املاح = 10
  • تنظیم مجدد: حجم املاح = 20 میکرولیتر در 10 = 2 میکرولیتر
  • مقادیر پلاگین در: (300 میکرولیتر) / حجم املاح = 100
  • تنظیم مجدد: حجم املاح = 300 میکرولیتر در 100 = 3 میکرولیتر

  یک سری رقیق کننده جانشینی از رقیق کننده های مرحله است که هر کدام دارای همان فاکتور رقیق سازی هستند ، جایی که از مواد رقیق شده مرحله قبلی برای ایجاد رقت بعدی استفاده می شود. اینگونه است که می توان منحنی های استاندارد برای ELISA را ساخت. برای ایجاد یک سری رقیق سازی ، از فرمول های زیر استفاده کنید:

  • حرکت حجم = حجم نهایی / (d f-1)
  • حجم رقیق = حجم نهایی - حجم حرکت
  • حجم مخلوط کل = حجم رقیق کننده + حجم حرکت
  • مثال 1: یک منحنی استاندارد 7 نقطه ای 1: 3 ، شروع به کار شسته و رفته ، به گونه ای که می توانید کپی های پیپت 50 میکرولیتر در هر چاه داشته باشید
  • محاسبات:
    • حداقل حجم رقیق کننده در هر مرحله را محاسبه کنید: 50 میکرولیتر در هر چاه * 2 برای کپی = حداقل 100 میکرولیتر. برای جبران خطای پیپت ، به عنوان مثال ، 20 میکرولیتر ، حجم اضافی اضافه کنید ، که حجم رقیق کننده مورد نظر ما را به 120 میکرولیتر می رساند
    • محاسبه حجم حرکت: حجم حرکت = 120 میکرولیتر در (3-1) = 60 میکرولیتر
    • حجم اختلاط کل را محاسبه کنید: حجم مخلوط کل = 120 میکرولیتر + 60 میکرولیتر = 180 میکرولیتر
    • اولین نقطه از منحنی استاندارد را که 180 میکرولیتر از استاندارد شسته و رفته است آماده کنید
    • رقیق کننده را برای بقیه نقاط ، یا شش قطعه از 120 میکرولیتر رقیق کننده آماده کنید
    • 60 میکرولیتر از نقطه اول را به دوم منتقل کنید و کاملاً مخلوط کنید ، 60 میکرولیتر از آن را به حالت بعدی منتقل کنید و غیره

    

    • مثال 2: یک منحنی استاندارد 7 نقطه ای 1: 2 ، با شروع 1: 5 شروع کنید ، به گونه ای که می توانید در هر چاه کپی های کپی 50 میکرولیتر را پیپت کنید
    • محاسبات:
      • حداقل حجم رقیق کننده در هر مرحله را محاسبه کنید: 50 میکرولیتر در هر چاه * 2 برای کپی = حداقل 100 میکرولیتر. برای جبران خطای پیپت ، به عنوان مثال ، 20 میکرولیتر ، حجم اضافی اضافه کنید ، که حجم رقیق کننده مورد نظر ما را به 120 میکرولیتر می رساند
      • محاسبه حجم حرکت: حرکت حجم = 120 میکرولیتر در (2-1) = 120 میکرولیتر
      • حجم اختلاط کل را محاسبه کنید: حجم مخلوط کل = 120 میکرولیتر + 120 میکرولیتر = 240 میکرولیتر
      • حجم رقیق اول را محاسبه کنید: شما به 240 میکرولیتر از 1: 5 نیاز دارید
      • اولین نقطه از منحنی استاندارد را که یک 1: 5 است ، آماده کنید ، بنابراین پیپت (240 میکرولیتر در 5) = 48 میکرولیتر املاح در رقیق کننده 192 میکرولیتر
      • رقیق کننده را برای بقیه نقاط ، یا شش قطعه از 120 میکرولیتر رقیق کننده آماده کنید
      • 120 میکرولیتر از نقطه اول را به دوم منتقل کنید و کاملاً مخلوط کنید ، 60 میکرولیتر از آن را به حالت بعدی منتقل کنید و غیره